小布解读 | 新型变体AAV.cc47来了，可实现高效、跨物种兼容性

在正常鼠中，比较AAV.cc47和AAV9的转导效率，结果显示心脏、胫骨前肌和大脑中AAV.cc47的转导效率增加，另外AAV.cc47在肝脏转导效率的增加存在统计学意义（图2b，c）。对心脏、胫骨前肌和肝脏的荧光强度进行定量分析，结果显示AAV.cc47的荧光强度分别高出21倍、16倍和2倍（图2d）。相比于AAV9，AAV.cc47在皮层（CTX）、小脑（CB）和海马体（HC）中转导神经元数量更多，转导量分别增加了4倍、3倍和4倍。在Ai9小鼠心脏、胫骨前肌和大脑中，AAV.cc47的转导效率增加，而肝脏的转导效率没有明显差异。研究表明，AAV.cc47和AAV9在各组织中生物分布没有差异（图3e），而组织中载体基因组拷贝数存在载体剂量依赖性。

此外，研究表明AAV.cc47对大脑神经元细胞的靶向性更强。在Ai9小鼠中检测两种AAV血清型的基因组编辑效率，结果显示心脏和骨骼肌中AAV.cc47-CRISPR基因组编辑效率更高。有趣的是，与AAV9相比，AAV.cc47处理组小鼠三种组织中gRNA的表达量都增加了3-4倍。

 

通过脑室注射方式比较AAV.cc47和AAV9在非人灵长类食蟹猴中的转导效率，结果显示在猴子大脑皮质和小脑中AAV.cc47表达和扩散能力更强，而在大脑皮质中AAV.cc47表现出更高的渗透能力。与AAV9相比，AAV.cc47对皮质神经元、胶质细胞和浦肯野细胞有更高的转导效率。为了评估AAV.cc47在其他物种的转导效率，研究人员在新生鼠和猪上进行了测试，结果说明AAV.cc47是一种跨物种兼容的载体，能够在小鼠、猪和NHPs大脑中实现更高的转导效率。
 

庞贝氏症(Pompe disease)是一种罕见疾病，又称为酸性α-葡萄糖苷酶缺乏症 

或糖原贮积症Ⅱ型(GSDⅡ)。由于溶酶体内缺乏酸性α-葡萄糖苷酶(GAA)，使糖原及麦芽糖不能转化为葡萄糖而被利用，以致体内大量糖原在骨骼肌、心肌和平滑肌等组织细胞内聚积而致病。为了探究AAV.cc47载体在小鼠疾病模型中递送治疗基因的能力，研究人员在庞贝病（Gaa−/−）小鼠模型中对AAV.cc47和AAV9载体递送能力进行了比较。给药后4周小鼠脑组织中GAA酶水平分析结果显示，AAV.cc47-GAA处理组GAA表达量更高，而且酶活性水平达到WT小鼠的67%，而在AAV9-GAA处理组的小鼠中只有WT水平的16%。在小鼠心脏和胫骨前肌中，只有AAV.cc47-GAA处理组酶活性显著增加。

杜氏肌营养不良是一种进行性的骨骼肌衰弱疾病，本病的发生是由于X染色体上编码肌营养不良蛋白的DMD基因的突变所引起。在mdx小鼠心脏中，AAV.cc47-CRISPR处理组比AAV9组的抗肌肉萎缩蛋白表达高6倍。在mdx小鼠的胫骨前肌，AAV.cc47-CRISPR处理组抗肌萎缩蛋白恢复率比AAV9组高2倍。定量结果表明与AAV9相比，AAV.cc47介导的基因组编辑使心脏和胫骨前肌第23外显子缺失的转录本分别增加了3倍和5倍。